CRISPR/Cas9基因编辑技术（包含Base editor）专题研讨会
2021年10月23～24日 网络精讲班
莫速乎科研会议平台主办
基因编辑技术指能够让人类对多个物种内的目标基因进行“精确编辑”，实现对特定DNA片段的删除、插入、定点突变等。与传统的TALEN和ZFN基因编辑技术相比，CRISPR/Cas9技术自问世以来，以其操作的便捷性，高效的基因编辑能力获得青睐，成为当下科研工作者的新宠儿。目前该技术已广泛应用于人、大鼠、小鼠、斑马鱼、果蝇、猪、水稻、小麦和拟南芥等动植物（细胞）以及细菌等微生物的基因组靶向改造，并已在功能基因组研究、疾病防治、动植物育种、动物疾病模型开发、基因治疗等领域展现出巨大的应用前景。
大量从事医学和生命科学的研究者，都将会在自身的研究领域中用到CRISPR/Cas9基因编辑技术，但在实际操作中，由于各种原因常常遭遇技术瓶颈，因而无法顺利地达成实验目标。本次研讨会将深入系统的讲解CRISPR/Cas9基因编辑工具原理，操作流程，理论结合实践，同时讲解实验操作容易遇到的问题及注意事项、解决方法，将让大家详细了解到具体如何利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰动物等。本次学习班将组建微信群与老师深入交流探讨，帮助解决后续实验过程中遇到的技术及理论问题。可提前准备好自己科研中遇到的问题，通过现场及后续的交流探讨，全面掌握CRISPR/Cas9技术应用的方法及技巧，避开科研路上的弯路和陷阱，轻松成为科研达人。
本次研讨会主办单位：
莫速乎科研教育（上海莫速乎教育投资有限公司） 上海荆麦信息科技中心
主讲专家：
主讲专家来自中国科学院，先后参与并承担973、863、国家自然基金课题及转基因重大专项课题。研究领域为基因组编辑、体细胞核移植、疾病模型的建立以及胚胎发育过程中表观遗传学研究等。有丰富的理论和实际研究经验。学员通过与专家直接交流，能够分享到这些顶尖学术机构的研究经验和实验设计的思路。学员通过集中专题学习后能够扩展思路，在研究技术方面领悟更多。
课程目标：
1、 掌握基因打靶与基因编辑技术(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9)，能够设计sgRNA靶点，构建CRISPR/Cas9质粒，用于基因敲除和敲入。
2、 掌握CRISPR/Cas9质粒转染方法, 阳性细胞克隆筛选方法体系，基因编辑细胞系的建立，基因修饰情况分析方法。
3、 掌握CRISPR/Cas9脱靶产生的原因，脱靶检测方法，降低脱靶问题的方法
4、 掌握CRISPR/Cas9的实际应用，对构建基因修饰小鼠和基因修饰大动物（猪）有较深入了解。
5、 掌握新基因编辑工具，如：Cpf1, C2C2, base editing等。
6、 掌握基因编辑研究领域前沿进展，基因编辑工具的拓展应用、临床应用等，形成利用基因编辑工具结合自己研究内容等科学思维。
课程安排：(具体课程进度根据实际反馈情况进行适当调整)
课程安排：(具体课程进度根据实际反馈情况进行适当调整)
第一天上午8:30-11:30
一、基因编辑技术概述
1、转基因与基因打靶技术
2、基因敲除与基因敲入技术
3、基因编辑技术的开创者——ZFNs
4、细胞基因组DNA的修复机制
5、第二代基因编辑技术——TALENs
6、第三代基因编辑技术——CRISPR/Cas9
7、基因编辑技术有多火？
二、CRISPR/Cas9基因组编辑技术原理
1、CRISPR/Cas系统
1.1、CRISPR/Cas系统的发现
1.2、CRISPR/Cas系统的组成
1.3、CRISPR/Cas系统的工作原理
2、CRISPR/Cas9技术的发展及其应用
2.1、CRISPR/Cas9技术的建立
2.2、CRISPR/Cas9技术的应用
2.3、CRISPR/Cas9技术的脱靶问题
三、Cas蛋白的选择
1、Cas蛋白的选择
1.1、Cas蛋白的分类
1.2、三种应用最广泛的Cas蛋白
1.3、Cas9蛋白的结构特点简介
1.4、Cas9蛋白与PAM序列
1.5、Cas9的密码子优化与NLS
1.6、如何选择Cas蛋白？
2、Cas蛋白资源查询
3、以上内容相关实验的注意事项、实验技巧、实验结果讲解
第一天下午13:30-17:00
四、CRISPR（gRNA）的设计与制备
1、设计gRNA之前需要确定的事（编辑策略的选择、基因结构分析及查询方法）
2、RNA的设计（在线互动设计演练）
3、gRNA表达载体的构建
3.1、gRNA的体外表达（RNP）
3.2、gRNA细胞表达载体构建
3.3、常见gRNA/Cas蛋白表达载体
4、以上内容相关实验的注意事项、实验技巧、实验结果讲解
五、gRNA活性检测
1、 Indel突变检测的基本策略
1.1、错配内切酶法（EMC）
1.2、TIDE/ICE分析法
1.3、TA克隆法
1.4、酶切片段长度多态性法（RFLP）
1.5、其他方法
2、基于胚胎的活性验证方法
3、以上内容相关实验的注意事项、实验技巧、实验protocol、实验结果讲解
六、基因编辑工具Cas12a(Cpf1)
1、Cpf1的发现
2、Cpf1与Cas9的区别
3、Cpf1的应用案例
4、Cpf1可同时介导多个基因的编辑
第二天上午8:30-11:30
七、利用CRISPR/Cas9技术创建基因组编辑细胞系
1、目标基因的基因组组成分析
1.1 目标基因在目的细胞中的表达情况
1.2 如何确定基因的重要的功能域
1.3 可变剪接及多转录本
2、基因组编辑策略设计
2.1基因敲除
2.2基因敲入
2.3定点突变
2.4大片段删除
3、sgRNA的设计与活性验证
3.1 如何选择位置合适的gRNA？
4、用于基因敲入的供体DNA的设计
4.1 Donor DNA的形式
4.2 使用ssODN作为Donor
4.3 设计ssODN的要点
4.4 插入位点与DSB位点一致的情况
4.5 插入位点与DSB位点不一致的情况
5、质粒（和/或供体）导入细胞系的方法（脂质体转染，电转，病毒转导）
6、阳性克隆筛选
6.1 抗生素筛选（Protocol）
6.2 挑单细胞克隆（Protocol）
6.3 基因型鉴定
6.4 根据打靶效率估算需要筛选的克隆数量
6.5 有限稀释法稀释细胞的流程（Protocol）
6.6 基因型鉴定
7、基因组编辑细胞系的建立
8、提高基因敲入（同源重组）效率的策略
9、以上内容相关实验的注意事项、实验技巧、实验protocol、实验结果讲解
八、CRISPR/Cas系统介导的基因编辑案例介绍
1、CRISPR常规工作流程
2、Knock-out案例1
3、Knock-out案例2
4、Knock-in案例
第二天下午13:30-17:00
九、利用CRISPR技术创建基因组编辑动物
1、CRISPR/Cas方法与传统方法的比较
2、基因编辑动物制备流程
3、通过显微注射法制备基因编辑小鼠
3.1、小鼠的超排和显微注射
3.2、胚胎移植和基因型鉴定
3.3、显微注射法获得的基因编辑动物的鉴定
4、通过体细胞克隆法制备基因编辑动物
4.1、供体细胞分离、培养
4.2、供体细胞的基因编辑
4.3、体细胞核移植操作
4.4、胚胎移植
4.5、基因编辑个体的鉴定和扩繁
十、CRISPR转录抑制/转录激活以及CRISPR screen
1、dCas9的特征简介
2、运用CRISPR技术进行转录调控的原理
3、CRISPR转录抑制/转录激活技术及优化
4、CRISPRoff
5、CRISPR screen及CRISPRa/i screen（高通量筛选）
十一、单碱基编辑与单碱基编辑器（CBE、ABE、PE）
1、 单碱基编辑器的原理
2、 单碱基编辑器的优化
3、 先导编辑技术原理及其应用
十二、基因编辑技术的脱靶问题
1、 脱靶产生的原因
2、 基因编辑工具的脱靶风险
3、 脱靶检测方法
4、 如何降低脱靶？
十三、Cas12和Cas13蛋白及其应用
1、 Cas12和Cas13与Cas9的差异
2、 Cas13特点及其在核酸检测中的应用
3、 SHERLOCK及DETECTR系统原理
十四、基因编辑技术相关资源
介绍CRISPR/Cas系统以及基因编辑相关的质粒、gRNA、文库、细胞、Protocol以及技术blog等资源。
会务信息
时间地点：
2021/10/23-24 网络精讲班
3200元/人 注册费包含网络直播平台费、专家讲课费及视频课程的费用。注册费用
主办单位：莫速乎教育（上海莫速乎教育投资有限公司）、上海荆麦信息科技中心
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| 票种名称 | 价格 | 原价 | 票价说明 |
| 普通票 | ¥3200 | ¥3200 | 线上注册费包含网络直播平台费、专家讲课费及视频课程的费用。 |
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