分子细胞生物学(Cell Biology)是在显微、亚显微和分子水平三个层次上,研究细胞的结构、功能和各种生命规律的一门科学。细胞生物学技术是现代生命科学研究中重要的工具,近年来,随着生物物理学,生物化学等相关学科的发展,细胞生物学研究技术也不断更新迭代,以高通量测序技术、数字PCR等技术为代表。为让广大从事医学、生命科学事业的人员更多的了解细胞生物学技术的基础理论、研究进展及实验技术方法等。本培训班将从实验思路、实验原理、实验技能等方面逐一为大家剖析。特于2021年7月1日至7月2日在北京举办全国“分子细胞生物学研究方法与实验技能精品培训班”。每位学员均在教师的指导下,独立完成一系列全部实验。
日期
时间
授课内容
7月1日
8:30-9:00
培训报到
7月1日
9:00-11:30
理论讲解:
现代细胞生物学常用技术原理及其应用概述
细胞生物学常用技术(培养、储存、分离、鉴定、分析等)
实验操作:
细胞培养无菌操作
细胞形态学观察,传代、计数、接种、爬片等
13:00-17:00
理论讲解:
细胞转染技术(生物转染-病毒、物理转染-显微注射、电转、基因枪、化学转染-阳离子脂质体、阳离子聚合物)
基于细胞培养的基因功能研究方法(基因沉默-siRNA、miRNA、shRNA、基因敲除-ZFN、TALEN、CRISPR、基因过表达-持续性表达、可诱导表达、组织特异性表达)
实验操作:
细胞质粒转染(DNA/siRNA)
细胞给药处理
细胞迁移和细胞侵袭实验
细胞划痕愈合实验
7月2日
9:00-11:30
理论讲解:细胞活力检测
流式技术原理及其应用
常用细胞活力检测方法
实验操作:
细胞活力检测(MTT、CCK-8、cell-titer blue)
细胞流式检测(细胞周期、细胞凋亡、细胞转染效率流式检测)
13:00-17:00
理论讲解:
免疫荧光技术及其应用
免疫印迹技术-蛋白质定量定性分析
实验操作:
免疫荧光技术: 细胞爬片、细胞固定、细胞通透、抗体染色
细胞/组织总蛋白提取,亚细胞器总蛋白提取(胞浆蛋白提取、核蛋白提取)
蛋白浓度测定:BCA法测定蛋白浓度
SDS-PAGE:蛋白胶的配置、蛋白电泳分离
Western blot:转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显影、灰度值测定、数据处理